Что значит пцр исследование. ПЦР в гинекологии

Гинекологический мазок в ПЦР-методике

Что значит пцр исследование. ПЦР в гинекологии

Взятие гинекологического мазка с последующим исследованием его с помощью ПЦР открывает возможности для диагностики инфекций, передаваемых половых путём. Открыто данное исследование было в 80-х годах 20 века.

Ученый, разработавший его, получил Нобелевское вознаграждение. Открытие позволяет узнавать возбудителя заболеваний при его минимальной концентрации в половых путях.

Высокая точность инновационной ПЦР-диагностики делает её незаменимым исследованием во многих сложных клинических случаях.

Методика исследования

Суть метода полимеразной цепной реакции заключается в размножении участка ДНК. Порой для возникновения симптомов определённых заболеваний необходима мизерная концентрация бактерий или вирусов.

Большинство микробиологических исследований не могут обнаружить патогенные организмы в таком разведении, а тем более их с точностью подсчитать.

В таких случаях только и выручает метод активного полимеразного наращивания.

ПЦР-диагностика требует для исследования участок ДНК, который подвергается клонированию.

К биологическому материалу добавляют различные реагенты, которые комплиментарно достраиваются к участкам выделенного генетического материала.

Многократное преумножение ДНК позволяет определить не только род, но и вид бактериологического или вирусного материала. Уточнение вида возбудителя делает лечение максимально эффективным и этиотропным.

Мазки ПЦР в гинекологии позволяют выделить возбудителей хламидиоза, гонореи, микоплазмоза, уреаплазмоза и многих других опасных инфекций. Часто эти заболевания долго существуют в скрытых, латентных формах и долго не проявляются клиническими симптомами. ПЦР позволяет выявить их на ранних стадиях и наиболее своевременно начать лечение.

Среди явных преимуществ полимеразной реакции выделены:

  1. Высокая точность определения природы патогенного микроорганизма.
  2. Возможность выделения вируса или бактерии при мизерных их концентрациях в биологическом материале.
  3. Анализы проводятся достаточно быстро.
  4. Заражение некоторыми микроорганизмами можно выявить только с помощью ПЦР. Вирус иммунодефицита также возможно выделить иди подтвердить с помощью данного диагностического мероприятия.

Исследование в гинекологии

В гинекологической практике мазок на ПЦР используется довольно широко. Ведь он позволяет выявить возбудителей большинства воспалительных заболеваний женских половых органов наружной и внутренней локализации. Анализ проводят женщинам, активно живущим половой жизнью, беременным пациенткам и проходящим прегравидарную подготовку.

  • Мазок ПЦР на ИППП нередко выявляет не только опасные бактериальные инфекции, но и заражение вирусами герпеса или папилломы человека. Последние и вовсе являются онкогенными провокаторами, излюбленным местом которых является ткань шейки матки.
  • ПЦР помогает выявить хламидии у беременных женщин, которые не обследовались на данную инфекцию до зачатия. Бактерия может вызывать различные уродства и пороки развития плода, а также вовсе прекращать его развитие. Носительство хламидий может долгое время не проявляться, быть выявлено лишь во время беременности как причина внутриутробной гибели зародыша. Но и при своевременном обнаружении бактерий у женщин «в положении» предоставляется возможным провести лечение без урона для матери и плода.

Является ошибочным мнение, что взятие мазков ПЦР на ИППП при беременности создает угрозу выкидыша.

Соскоб для исследования действительно берут из шейки матки, но таким образом, что не затрагивают растущий эмбрион.

К тому же, данная анатомическая область по длине составляет около 4 см вне беременности и несколько уменьшается на поздних сроках гестации. Это позволяет достаточно безопасно взять материал для исследования.

Увеличивают достоверность анализа некоторые простые правила, которые следует соблюдать женщинам перед исследованием:

  1. Пациенткам рекомендуется не мочиться 2-3 часа до выполнения соскоба из шейки матки.
  2. За день до взятия материала необходимо отменить прием антибактериальных и бактериостатических средств.
  3. Вне беременности лучше сдавать мазок в середине менструального цикла. Неблагоприятным периодом считается время до начала менструального кровотечения или сразу после него.
  4. 2-3 дня не рекомендуется использовать локальные средства контрацепции или любые другие вагинальные медикаменты.
  5. Сутки до исследования нельзя иметь половые отношения.
  6. Накануне взятия пробы запрещается принимать душ и обмывать наружные половые органы.
  7. Нельзя брать соскоб из шейки матки в тот же день, когда проводилось кольпоскопическое исследование.

Довольно простые рекомендации позволят наиболее точно определить заболевание, передающееся половым путем, по генетическому материалу его возбудителя.

Показания для ПЦР

Полимеразная реакция как метод диагностики представляет собой новый и инновационный способ идентификации микроорганизмов. К его помощи активно прибегают в следующих случаях:

  1. При установлении причин бесплодия. Невозможность зачать ребенка часто связана с инфекцией половых органов, которую тяжело распознать обычными способами. Латентное течение многих инфекций определяет склонность к прерыванию беременности, несостоятельности имплантации плодного яйца.
  2. При установленной природе инфекционного возбудителя ПЦР проводится для выяснения фазы заболевания: острой или хронической.
  3. Мазки ПЦР у женщин берут в случае тяжело протекающих беременностей. Внутриутробные инфекции, приобретенные до беременности и в ее активное течение, вызывают задержку развития и гибель плода. Рождение детей с аномалиями развития заставляет обследовать мать повторно в послеродовом периоде.
  4. В ходе диагностической процедуры возможно установить также чувствительность и устойчивость микроорганизмов к антибиотикам.

Несмотря на кажущуюся сложность, проведение полимеразной реакции продолжатся не более 4 дней. Это время необходимо для построения полноценной молекулы ДНК, которую удается идентифицировать с конкретным микроорганизмом. Взятие биологического материала как субстрата для анализа и вовсе занимает до 5 минут.

Результат ПЦР-метода имеет два варианта интерпретации: позитивный либо негативный:

  • Положительный ответ полимеразной реакции подтверждает наличие в материале микробных следов, а также указывает род и вид возбудителя.
  • Отрицательный результат говорит о стерильности биологического материала, отсутствии бактерий и вирусных частиц.

На основе расшифровки мазка врач определяется с методикой лечения.

Этиотропные антибиотикотерапия или противовирусное лечение позволяют быстро и бесследно очистить микрофлору от возбудителя опасных инфекций.

Своевременная диагностика не позволяет навредить и растущему плоду во время беременности матери – при проведении терапевтических курсов эрадикации возбудителей инфекций, передающихся половым путем.

Источник: http://ZdorovieLedy.ru/diagnostika/mazok-pcr-v-ginekologii.html

Пцр в гинекологии. пцр-диагностика внутриутробных инфекций

Что значит пцр исследование. ПЦР в гинекологии

В гинекологии ПЦР-анализы — обязательная диагностическая процедура, входящая в профиль обследований различных женских заболеваний — в первую очередь, для диагностики широкого спектра ЗППП , заболеваний передающихся половым путем.

Врач назначает анализ методом ПЦР в следующих случаях:

  • в острой фазе заболеваний, передающихся половым путем (ЗППП)
  • при подозрении на хроническую стадию ЗППП
  • для выяснения причины хронического воспаления мочеполовых путей
  • при тяжело протекающей беременности
  • для выявления причин бесплодия
  • для определения чувствительности выделенной у пациента микрофлоры к антибиотикам, т. е. чтобы выяснить какой антибиотик лучше и быстрее всего ее уничтожит, а к какому у микрофлоры уже выработан иммунитет
  • с целью контроля эффективности проводимого лечения антибиотиками
  • для определения «биологической чистоты» донорской крови – кровь донора может содержать инфекции, которые могут передаться больному человеку

В диагностике инфекционных заболеваний — бактериальной или вирусной природы, включающих ИППП (инфекции, передающиеся половым путем)- анализ методом ПЦР-мазка приобрел огромное практическое значение. ПЦР-анализ вирусных инфекций позволяет изучать и исследовать как хронические, так и редкие, малоизученные заболевания.

Наименование услуги Стоимость
Жидкостная цитология2 200 руб.
Соскоб на грибы (демодекс)650 руб.
Анализ мочи общий350 руб.
Анализ мочи (2-х стаканная проба)630 руб.
Анализ кала общий (копрограмма)430 руб.
Смотреть весь прайс-лист

Методом ПЦР успешно диагностируют следующие вирусные заболевания:

  • Вирусный гепатит
  • СПИД
  • Сальмонеллез
  • Дифтерия
  • Бруцеллез
  • Холера
  • Токсоплазмоз
  • Цитомегалия

Например, инфекционный процесс, вызванный вирусом гепатита С (ВГС) — вирусный гепатит С — невозможно выявить никакими другими лабораторными методами исследования, кроме диагностики ПЦР: вирус гепатита не поддается культивированию на питательных средах, не существует лабораторных наборов для проведения реакции антиген-антитело, и антитела к вирусу гепатита образуются чрезвычайно медленно, диагностировать гепатит в острой фазе с помощью серодиагностики (ИФА, ПИФ, РИФ и других методов) возможно в одном случае из 25 тысяч. Учитывая эти обстоятельства, врачи-венерологимедицинского центра «Евромедпрестиж» пришли к выводу, что ПЦР-мазок – единственно возможный метод лабораторной диагностики вирусного гепатита и некоторых других инфекций на ранней стадии, благодаря высокой достоверности результатов ПЦР.

ПЦР-анализ отлично «справляется» с обнаружением внутриклеточных паразитов и микроорганизмов, способных долгое время «скрываться» в организме человека — так называемые «скрытые» инфекции, трудно поддающиеся диагностике, но способные приносить огромный вред человеку.

ПЦР-диагностика внутриутробных инфекций

Во время беременности лабораторная диагностика инфекций приобретает особое значение, так как существует опасность заражения инфекцией плода.

 Анализы на цитомегаловирус, токсоплазмы, вирус герпеса, вирус краснухи, микоплазмы и хламидии образуют так называемый TORCH-комплекс , обязательный этап пренатальной диагностики для каждой женщины.

Для проведения анализа в качестве материала используется амниотическая жидкость или ворсинки хориона.

Диагностика внутриутробных инфекций у новорожденного ребенка стала возможной только благодаря методам ПЦР-анализа.

 Серодиагностика (РИФ, ПИФ, ИФА-анализы) малоэффективна для определения инфекций, поскольку основана на выявлении антител ДНК к инфекциям, а формирование иммунной системы у новорожденного начинается только спустя несколько месяцев после рождения.

 В этот период организм ребенка может или вообще не вырабатывать антитела, или «принимать» материнские антитела класса IgG, проникающие к ребенку через плаценту еще во время беременности.

Конъюнктивит, пневмония и многие другие серьезные заболевания у малыша могут возникнуть вследствие поражения хламидиями, микоплазмой. Для того чтобы выявить причину этих заболеваний с помощью ПЦР-анализа у ребенка исследуется эпителиальный соскоб с конъюнктивы или задний стенки глотки, кроме того, материалом для диагностики может служить моча или слюна.

ПЦР-диагностика нашла свое применение и в других областях клинической медицины. В гастроэнтерологии метод ПЦР-анализа — ведущий метод диагностики геликобактериоза. Геликобактер — возбудитель этого заболевания живет в кислой среде желудка и при определенных условиях провоцирует развитие язвенной болезни.

В пульмонологии методы ДНК-анализа используются для диагностики рецидивирующих респираторных заболеваний, атипичной пневмонии, хронического бронхита, туберкулеза, поскольку частой причиной этих болезней являются микоплазмы и хламидии.

Большинство заболеваний, которые Вы можете диагностировать методом ПЦР-диагностики в нашем медицинском центре «Евромедпрестиж», отражены в ниже:

Цервицит ЭндометритБактериальный вагинозЦервикальный соскоб аспират из полости матки
ВагинитВульвовагинитЭпителиальный соскоб из влагалища
УретритПростатитСоскоб из уретры МочаСок простаты
ЭпидидимитСперма
ПроктитСоскоб из прямой кишки
БесплодиеНевынашивание беременностиЭктопическая беременностьЦервикальный соскоб
Синдром РейтераЭпителиальный соскоб из уретры Эпителиальный соскоб из конъюнктивы
Герпетические поражения гениталий, слизистых оболочек, кожных покровов и дрЭпителиальный соскоб с пораженного участка Кровь
КандиломатозЭпителиальный соскоб с пораженного участка
Рецидивирующие хронические заболевания верхних отделов дыхательной системыЭпителиальный соскоб с задней стенки глотки Бронхоальвеолярный лаважМокрота
Цитомегаловирусная инфекцияКровь МочаСлюна
Внутриутробная цитомегаловирусная инфекцияАмниотическая жидкость Биоптаты
Туберкулез легкихМокрота Бронхоальвеолярный лаваж
Туберкулез мочеполовых и др. органовМоча Соскоб с пораженного участка
Язва желудкаГастритДуоденитБиоптат слизистой
Вирусный гепатитКровь Биоптаты печени

Сдать анализы методом ПЦР и провести полную диагностику и лечение инфекционных заболеваний Вы можете в медицинском центре «Евромедпрестиж».

Источник: https://policlinica.ru/metod-ptsr-v-ginekologii.html

ПЦР: что это такое? Диагностика инфекционных заболеваний методом полимеразной цепной реакции

Что значит пцр исследование. ПЦР в гинекологии

Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.

В конце статьи см. словарь
Полимеразную цепную реакцию (ПЦР, PCR) изобрёл в 1983 году Кэри Мюллис (американский учёный). Впоследствии он получил за это изобретение Нобелевскую премию. В настоящее время ПЦР-диагностика является, одним из самых точных и чувствительных методов диагностики инфекционных заболеваний.
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — экспериментальный метод молекулярной биологии, способ значительного увеличения малых концентраций определённых фрагментов нуклеиновой кислоты (ДНК) в биологическом материале (пробе).
В основе метода ПЦР лежит многократное удвоение определённого участка ДНК при помощи ферментов в искусственных условиях (in vitro). В результате нарабатываются количества ДНК, достаточные для визуальной детекции. При этом происходит копирование только того участка, который удовлетворяет заданным условиям, и только в том случае, если он присутствует в исследуемом образце. Кроме простого увеличения числа копий ДНК (этот процесс называется амплификацией), ПЦР позволяет производить множество других манипуляций с генетическим материалом (введение мутаций, сращивание фрагментов ДНК), и широко используется в биологической и медицинской практике, например, для диагностики заболеваний (наследственных, инфекционных), для установления отцовства, для клонирования генов, введения мутаций, выделения новых генов.

Специфичность и применение

ПЦР – метод молекулярной диагностики, ставший для ряда инфекций «золотым стандартом», проверен временем и тщательно апробирован клинически. Метод ПЦР позволяет определить наличие возбудителя заболевания, даже если в пробе присутствует всего несколько молекул ДНК возбудителя.

ПЦР позволяет диагностировать наличие долго растущих возбудителей, не прибегая к трудоёмким микробиологическим методам, что особенно актуально в гинекологии и урологии при диагностике урогенитальных инфекций, передающихся половым путем (ИППП).
Также, этим методом проводят диагностику вирусных инфекций, таких как гепатиты, ВИЧ и др. Чувствительность метода значительно превосходит таковую у иммунохомических и микробиологических методов, а принцип метода позволяет диагностировать наличие инфекций со значительной антигенной изменчивостью.
Специфичность ПЦР при использовании технологии PCR даже для всех вирусных, хламидийных, микоплазменных, уреаплазменных и большинства других бактериальных инфекций достигает 100%. Метод ПЦР позволяет выявлять даже единичные клетки бактерий или вирусов. ПЦР-диагностика обнаруживает наличие возбудителей инфекционных заболеваний в тех случаях, когда другими методами (иммунологическими, бактериологическими, микроскопическими) это сделать невозможно.
Особенно эффективен метод ПЦР для диагностики трудно культивируемых, некультивируемых и скрыто существующих форм микроорганизмов, с которыми часто приходится сталкиваться при латентных и хронических инфекциях, поскольку этот метод позволяет избежать сложностей, связанных с выращиванием таких микроорганизмов в лабораторных условиях.
Применение ПЦР-диагностики также очень эффективно в отношении возбудителей с высокой антигенной изменчивостью и внутриклеточных паразитов. Методом ПЦР возможно выявление возбудителей не только в клиническом материале, полученном от больного, но и в материале, получаемом из объектов внешней среды (вода, почва и т. д.). В урологической и гинекологической практике – для выявления хламидиоза, уреаплазмоза, гонореи, герпеса, гарднереллёза, микоплазменной инфекции, ВПЧ – вирусов папилломы человека; в пульмонологии – для дифференциальной диагностики вирусных и бактериальных пневмоний, туберкулёза; в гастроэнтерологии – для выявления хеликобактериоза; в клинике инфекционных заболеваний – в качестве экспресс-метода диагностики сальмонеллёза, дифтерии, вирусных гепатитов В, С и G; в гематологии – для выявления цитомегаловирусной инфекции, онковирусов.
Специфичность ПЦР основана на образовании комплементарных комплексов между матрицей и праймерами – короткими синтетическими олигонуклеотидами длиной 18 – 30 букв. Каждый из праймеров сопоставим (комплементарен) с одной из цепей двуцепочечной матрицы, обрамляя начало и конец амплифицируемого участка. После соединения (гибридизации) матрицы с праймером (отжиг), последний служит затравкой для ДНК-полимеразы при синтезе комплементарной цепи матрицы.

Проведение ПЦР

Для проведения ПЦР в простейшем случае требуются следующие компоненты:

  • ДНК-матрица, содержащая тот участок ДНК, который требуется амплифицировать;
  • два праймера, комплементарные концам требуемого фрагмента;
  • термостабильная ДНК-полимераза;
  • дезоксинуклеотидтрифосфаты (A, G, C, T);
  • ионы Mg2+, необходимые для работы полимеразы;
  • буферный раствор.

ПЦР проводят в амплификаторе — приборе, обеспечивающем периодическое охлаждение и нагревание пробирок, обычно с точностью не менее 0,1°C. Чтобы избежать испарения реакционной смеси, в пробирку добавляют высококипящее масло, например, вазелиновое. Добавление специфичеких ферментов может увеличить выход ПЦР-реакции.
Ход реакции

Обычно при проведении ПЦР выполняется 20 – 35 циклов, каждый из которых состоит из трех стадий.

Двухцепочечную ДНК-матрицу нагревают до 94 – 96°C (или до 98°C, если используется особенно термостабильная полимераза) на 0,5 – 2 минуты, чтобы цепи ДНК разошлись.

Эта стадия называется денатурацией — разрушаются водородные связи между двумя цепями. Иногда перед первым циклом проводят предварительный прогрев реакционной смеси в течение 2 – 5 минут для полной денатурации матрицы и праймеров.

Когда цепи разошлись, температуру понижают, чтобы праймеры могли связаться с одноцепочечной матрицей. Эта стадия называется отжигом. Температура отжига зависит от праймеров и обычно выбирается на 4 – 5°С ниже их температуры плавления. Время стадии — 0,5 – 2 минут.

ДНК-полимераза реплицирует матричную цепь, используя праймер в качестве затравки. Это — стадия элонгации. Температура элонгации зависит от полимеразы. Часто используемые полимеразы наиболее активны при 72°C.

Время элонгации зависит как от типа ДНК-полимеразы, так и от длины амплифицируемого фрагмента. Обычно время элонгации принимают равным одной минуте на каждую тысячу пар оснований.

После окончания всех циклов часто проводят дополнительную стадию финальной элонгации, чтобы достроить все одноцепочечные фрагменты. Эта стадия длится 10 – 15 мин.

Подготовка материала к исследованию и транспорт его в лабораторию Для успешного проведения анализа важно правильно собрать материал у пациента и правильно провести его подготовку. Известно, что в лабораторной диагностике большинство ошибок (до 70%) совершается именно на этапе пробоподготовки. Для взятия крови в лаборатории ИНВИТРО  в настоящее время применяются вакуумные системы, которые с одной стороны минимально травмируют пациента, а с другой – позволяют произвести взятие материала таким образом, что он не контактирует ни с персоналом, ни с окружающей средой. Это позволяет избежать контаминации (загрязнения) материала и обеспечивает объективность анализа ПЦР.

Словарь

ДНК – дезоксирибонуклеиновая кислота – биологический полимер, один из двух типов нуклеиновых кислот, обеспечивающих хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов. Основная роль ДНК в клетках — долговременное хранение информации о структуре РНК и белков.

РНК– рибонуклеиновая кислота – биологический полимер, близкий по своему химическому строению к ДНК. Молекула РНК построена из тех же мономерных звеньев – нуклеотидов, что и ДНК. В природе РНК, как правило, существует в виде одиночной цепочки. У некоторых вирусов РНК является носителем генетической информации. В клетке играет важную роль при передаче информации от ДНК к белку.

РНК синтезируется на ДНК-матрице. Процесс этот называется транскрипцией. В ДНК имеются участки, где содержится информация, ответственная за синтез трех видов РНК, различающихся по выполняемым функциям: информационной или матричной РНК (мРНК), рибосомальной (рРНК) и транспортной (тРНК). Все три вида РНК тем или иным способом участвуют в синтезе белка.

Однако информация по синтезу белка содержится только в мРНК.

Нуклеоти́ды – основная повторяющаяся единица в молекулах нуклеиновых кислот, продукт химического соединения азотистого основания, пятиуглеродного сахара (пентозы) и одной или нескольких фосфатных групп.

Нуклеотиды, представленные в нуклеиновых кислотах, содержат одну фосфатную группу.

Они называются по содержащемуся в них азотистому основанию – адениновый (A), содержащий аденин, гуаниновый (G) – гуанин, цитозиновый (C) – цитозин, тиминовый (Т) – тимин, урациловый (U) – урацил.

В состав ДНК входят 4 типа нуклеотидов – A, T, G, C, в состав РНК также 4 типа – A, U, G, C. Сахаром в составе всех нуклеотидов ДНК является дезоксирибоза, РНК – рибоза. При образовании нуклеиновых кислот нуклеотиды, связываясь, образуют сахаро-фосфатный остов молекулы, по одну сторону которого находятся основания.

Праймер – котроткая ДНК, используемая для репликации матричной цепи. Каждый из праймеров комплементарен одной из цепей двуцепочечной матрицы, обрамляя начало и конец амплифицируемого участка. 

Литература

  1. Глик Б., Пастернак Дж. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение. Пер. с англ. — М.: Мир, 2002. — 589 с., илл. ISBN 5-03-003328-9

Источник: https://www.invitro.ru/library/labdiagnostika/16110/

Пцр у женщин

Что значит пцр исследование. ПЦР в гинекологии

ПЦР – полимеразная цепная реакция. Это генетический тест. Позволяет в собранном у пациента материале обнаружить ДНК(РНК) или части ДНК(РНК) инфекционного агента или дезоксирибонуклеазу (рибонуклеазу) самого пациента.

Амплификация – копирование коротких фрагментов ДНК микроорганизма. Осуществляется несколько раз в пределах одного температурного цикла в условиях специализированной лаборатории.

Свойства метода ПЦР:

  • высокая точность и чувствительность метода
  • специфичность (выделяют ДНК инфекционного агента, ДНК пациента и других микроорганизмов)
  • универсальность выполнения лабораторного этапа исследования
  • скорость выполнения ПЦР выше, чем при использовании столь же точного культурального метода (от 5 часов до суток)

ПЦР является достаточно точным анализом, используемым при постановке диагноза при любом инфекционном заболевании.

Когда результат трактуется как ложноотрицательный?

Если в крови, моче, мокроте или мазках нет следов возбудителя, так как микроорганизмов в принципе мало, или материал забран с нарушением требований к технике манипуляции. Ложноположительных результатов при выполнении полимеразной цепной реакции не бывает.

ПЦР не зависит от пола пациента, сдававшего данный материал.  Соответственно, по сути, Пцр у женщин ничем не отличается от ПЦР у мужчин.

Что нужно сдавать на ПЦР

Мазки:

  • из мочеиспускательного канала
  • из прямой кишки
  • со слизистой глаза и нижнего века
  • из цервикального канала
  • из влагалища
  • из зева
  • с поверхности кожных высыпаний и язв

Кровь, секрет предстательной железы, вода, почва, смывы с поверхностей и даже продукты.

Применение ПЦР

  • диагностика заразных заболеваний, в том числе венерических
  • определение генетических заболеваний
  • генотипирование, создание генотипического паспорта
  • анализ ГМО продуктов и качества продуктов питания
  • определение личности
  • установление отцовства

На какие инфекции проверяет мазок на ПЦР

ПЦР чувствительна к любым известным микроорганизмам.

То есть способна выделить ДНК любого возбудителя: бактерии, вирусы, простейшие, грибы.

Список возбудителей, которые выявляются методом ПЦР, совпадает со списком инфекционных агентов, способных вызывать ИППП.

  • сифилис
  • трихомониаз
  • хламидиоз
  • микоплазма и уреаплазма
  • гонорея
  • ВПЧ
  • мягкий шанкр
  • гарднереллез
  • генитальный или иной герпес
  • донованоз
  • цитомегаловирусная инфекция
  • ВИЧ
  • вирусные гепатиты
  • контагиозный моллюск
  • саркома Капоши
  • кандидоз
  • фтириаз
  • чесотка

Когда назначается ПЦР

Имеет значение срок забора материала. Анализ будет информативен уже в продромальном периоде заболевания. В разгар инфекционного процесса результат достигается практически с гарантированной точностью.

Для определения эффективности лечения ПЦР назначают не ранее чем через 30-60 дней по завершении курса антибиотиков.

Технология забора мазка на ПЦР

Для женщин необходима некоторая подготовка к забору мазка, в том числе на ПЦР.

Подготовка к забору мазков:

  • в день забора материала не мыться, не спринцеваться
  • не мочиться минимум за 2 часа до забора
  • мазки не собирают в период менструации и в течение 2 дней после нее
  • накануне не применять антисептические и антибактериальные средства, в том числе местно (свечи, орошение, таблетки, инъекции)
  • антибиотики должны быть приняты курсом, но первое исследование назначают через месяц после последнего приема

Рассмотрим, как именно берут мазок на Пцр у женщин.  Процедура выполняется врачом-гинекологом, урологом, венерологом или акушеркой при помощи стерильного тампона.

Им проводят по местам забора материала, по кругу, без нажатия:

  • ​мочеиспускательный канал
  • цервикальный канал
  • стенка влагалища
  • ​ампула прямой кишки
  • слизистая глаза и нижнее веко
  • задняя стенка глотки и миндалины

Тампон помещается в стерильную пробирку или им проводится по предметному стеклу с фиксатором. После чего материал доставляется в лабораторию.

Соскоб проводится тем же стерильным тампоном. Только вращательными движениями и с приложением некоторого усилия или специальной «щеткой». Далее щетка или тампон также помещается в стерильную пробирку или ими проводится по предметному стеклу.

Забор мочи на ПЦР осуществляется стерильный контейнер, первые 50 мл, не выделяя средней порции. Далее контейнер закрывается и доставляется в лабораторию.

Забор мокроты на ПЦР проводится в стерильный контейнер. Предварительно пациенту предлагают выпить побольше жидкости.

С утра пациенту предлагают откашляться и отделить мокроту в стерильную посуду. Данное исследование используют для диагностики туберкулеза, хламидиоза и микоплазмоза.

Как берут кровь на ПЦР

Для сдачи крови в процедурную надо явиться натощак, накануне допустим только легкий ужин. При анализе методом ПЦР используется кровь из вены, для чего специальной иглой на вакутейнере производят прокол.

После присоединяют стерильную пробирку с пробкой к другому концу иглы. Под действием градиента давления (вакутейнер создает вакуум между иглой и пробиркой) кровь легко поступает в пробирку.

ПЦР крови на ВИЧ и гепатиты выполняется в реальном времени с определением концентрации ДНК (РНК) в плазме. Это исследование требуется для решения о назначении противовирусной терапии и прогноза степени риска передачи вируса от беременной к плоду.

Какой материал брать на исследование, решает врач исходя из клинической ситуации. Обычно мазки и моча используются для проведения ПЦР при определении возбудителей ЗППП.

Кровь на ПЦР забирается при постановке диагноза герпеса, цитомегаловируса, ВИЧ и гепатитов, а также токсоплазмоза.

Мазок на ПЦР из зева или, проще говоря, изо рта – при диагностике мононуклеоза и ЗППП: цитомегаловирус, ВПЧ, сифилис.

Мазок из ануса на ПЦР применяется при определении подавляющего большинства ЗППП.

Какие именно возбудители будут разыскиваться при помощи ПЦР – определяет врач- венеролог после осмотра.

Хранение и транспортировка ПЦР анализов

Стерильные емкости и предметные стекла категорически нельзя замораживать. Хранить в помещении не более двух часов, и только в крайних случаях – в холодильнике еще 20 часов.

Необходимость обеспечивать температурный режим транспортировке в специальную генетическую лабораторию обуславливает использование термоконтейнеров. В них поддерживается температура от 4 до 8 градусов Цельсия.

Поэтому очевидным плюсом медицинской организации является собственная лаборатория, способная выполнить полимеразную цепную реакцию.

Аналитический этап ПЦР диагностики

В лаборатории сперва выделяется ДНК из предоставленного образца.

Далее материал помещается в термостат в микроцентрифужных пробирках с добавлением амплификационной смеси на несколько часов.

Для сравнения выполняется контроль с известными ДНК определенных микроорганизмов. Выполняется электрофорез со смесью бромистого этидия и ДНК, что вызывает свечение в ультрафиолетовых лучах.

Электрофорез позволяет разделить продукты амплификации. При положительном результате теста они дают оранжевое свечение в коротком участке светового спектра.

Интерпретация результатов ПЦР анализа

При определении наличия ДНК (РНК) полимеразная цепная реакция считается положительной, и это точно демонстрирует наличие возбудителя.

Для диагностики вируса иммунодефицита человека и гепатитов В и С используют ПЦР с определением концентрации ДНК (РНК).

Для ДНК высокой считается концентрация 1,0 x 105 копи на такие инфекции как герпес, цитомегаловирус, ВИЧ и гепатиты, а также токсоплазмоз.

Количественная оценка ПЦР или количественный анализ экспрессии генов говорит об их активности. В результате экспрессии генов образуются определенные белки. которые и считаются в рамках количественной ПЦР в реальном времени. По результату этого исследования врач судит об инфекционной нагрузке и активности возбудителей.

При диагностике ИППП используют несколько диагностических исследований. ПЦР позволяет довольно точно определить наличие определённого возбудителя уже в продромальный период развития инфекции.

Когда симптомы больше напоминают простуду, чем конкретное заболевание. Интересно также оценить напряженность иммунного ответа макроорганизма. Для этого назначаются серологические исследования ИФА, РПГА, РИФ и прочие.

Серология показывает, сколько антител и к какому именно антигену сформировалось, какая стадия заболевания наблюдается. Существует понятие «титр антител». То есть их количество, характеризующее напряженность, то есть выраженность иммунитета. Случается, что ответы разных исследований противоречат друг другу.

ПЦР является реакцией проверки, то есть именно по её положительному результату судят о наличии возбудителя. Например, если ПЦР положительна, а мазок на флору отрицательный.

Мы считаем, что в последнем случае в материал просто не попало нужного количества микроорганизмов. Или они не окрасились по разным причинам. Если ПЦР положительна, а серологические пробы отрицательны, то организм человека не вырабатывает иммунного ответа на возбудителя.

Наблюдается состояние иммуносупрессии, что бывает:

  • при ВИЧ
  • при приёме специальных лекарственных препаратов после трансплантации
  • при лечении аутоиммунных заболеваний
  • в период выздоровления после тяжёлой болезни
  • при истощении или тяжелой хронической усталости

Если ПЦР отрицательна, а серологические пробы положительны, то нужно смотреть на фракцию иммуноглобулинов. IgM характерен для острой фазы течения заболевания при первичном заражении.

В такой ситуации врач может повторить забор материала. Или ориентироваться по точному, но длительно выполняемому культуральному методу (посев культуры возбудителя на питательные среды).

Высокий титр Ig A или IgG могут свидетельствовать о хронической инфекции в стадии обострения. А их низкие титры – просто о том, что пациент перенёс данное заболевание. Именно поэтому серологические пробы не используют для контроля эффективности лечения. В частности, проводить ПЦР нужно после определенного промежутка.

Цена анализа зависит от материала, использованного для ПЦР, и колеблется от 350 до 1200 рублей.

При необходимости сдать ПЦР анализы обращайтесь к автору этой статьи – венерологу в Москве с многолетним опытом работы.

Источник: https://onvenerolog.ru/zppp/pcr-u-zhenshhin.html

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) диагностика: что это такое

Что значит пцр исследование. ПЦР в гинекологии

В современном мире существует множество способов обнаружить возбудителей заболеваний на разных этапах развития заболевания.

Одним из таких методов является PCR (метод ПЦР или полимеразная цепная реакция), позволяющий выявить инфекцию на самом раннем этапе.

Буквально одна единица ДНК или РНК уже могут указать на наличие того или иного возбудителя в организме при должном уровне подготовки пациента и профессионализма лаборантов медицинского учреждения.

ПРЦ-исследование, что это такое?

Анализ на ПЦР заключается в копировании ДНК и РНК возбудителя в лабораторных условиях. Так как основным хранилищем генетической информации является ДНК (дезоксирибонуклеиновая кислота), образованная 2 нитями, соединенными нуклеотидами, именно при множественном копировании (синтезе) этой кислоты можно установить наличие патогенного организма, если речь идет о бактерии.

Бактерии имеют свою собственную оболочку, защищающую их от внешней среды, которая нередко является агрессивной по отношению к последним. У вирусов же нет собственной оболочки (у некоторых представителей имеется нечто похожее на оболочку), а информацию в себе несет не ДНК, а РНК (рибонуклеиновые кислоты).

РНК устроены таким образом, что они встраиваются в цепи ДНК организма-переносчика и меняют их, позволяя проникать в клетки и жить за счет организма.

Грубо говоря, бактерии и вирусы оставляют «отпечатки» своими ДНК и РНК, которые и выявляет анализ ПЦР. Эти «отпечатки», как и отпечатки пальцев, являются уникальными для каждого возбудителя.

Поэтому ПЦР позволяет выявить заболевание на любых этапах, даже если развитие патогена происходит бессимптомно.

До широкого внедрения ПЦР в гинекологии и урологии на ИППП широко использовались методы:

  • микроскопия — окрашенные и неокрашенные препараты исследуются через микроскоп. Метод очень завязан на опытности лаборанта. Таким методом хорошо выявляются бактерии, имеющие большой размер (гарднереллы, кандиды, трихомонады, гонококки);
  • бактериология — метод заключается в выращивании возбудителей инфекции на питательном агаре, идентификации возбудителя и определения чувствительности его к антибиотикам. Долгое время считался «золотым стандартом». К минусам относят необходимость быстрой доставке материала в КДЛ (клинико-диагностическая лаборатория), сроки выращивания и выяснения чувствительности к группам антибактериальных препаратов (как правило, 5-7 суток);
  • иммуноферментный анализ — Определение антител организма, возникающих в ответ на внедрение антигена возбудителем инфекции. Из плюсов стоит отметить возможность определения стадии заболевания (острая стадия сопровождается наличием IgG в сыворотке крови, хроническая – IgM.) К минусам относится невозможность определения у людей с ослабленным иммунитетом, а также специфичность ИФА. Другими словами, при наличии только результата иммуноферментного анализа, невозможно было выставить диагноз, а можно было только определить, что организм борется с какой-либо инфекцией.

Как происходит сдача анализов на ПЦР

В зависимости от материала, который забирается для проведения анализа ПЦР, существует несколько обязательных правил для пациента. Кровь сдается строго натощак утром.

Мочу тоже стоит сдавать утром, первую порцию. Мокрота также сдается натощак, хотя это и необязательно. Мазки сдаются в любое время суток и имеют специфические требования.

Мазок из ротоглотки также следует сдавать утром до приема пищи.

Забор материала производится сертифицированным специалистом стерильными одноразовыми инструментами. Берут анализ крови на ПЦР одноразовым стерильным шприцом, из вены забирают приблизительно 1-2 мл венозной крови для выявления таких инфекций как герпес или ВПЧ (вирус папилломы человека). Мочи достаточно 10 мл, мокроты – субстанции, размером со спичечную головку.

Для каждого вида анализа ПЦР существуют свои требования:

  • кровь, как говорилось выше, забирают из вены натощак;
  • мочу следует сдавать утром, первую порцию. Но, если забор является срочным, то достаточно сдать мочу по прошествии 2 часов после последнего мочеиспускания. Это позволит инфекции набрать необходимую критическую массу на 1 мл для более простого обнаружения патогена;
  • как берут соскоб из уретры. Первым делом обрабатывают раствором NaCl 0.9% наружное отверстие уретры. Затем, совершая циркулярные движения, зонд проводят на 2-4 см в уретру. Головку зонда, которая имеет щетинистое строение отсекают и кладут в пробирку со специальным раствором (своеобразный питательный агар для бактерий);
  • из влагалища производят мазок. Предварительно убирают секрет бартолиновых желез, затем из заднего нижнего свода влагалища специальной ватной палочкой происходит забор материала. При видимых патологических изменениях во влагалище мазок следует брать непосредственно на поврежденном участке;
  • как проводят соскоб из цервикального канала у женщин. Удалив слизь из наружных половых путей, зонд на 0,5 – 1,5 см вводят в шейку матки, совершают циркулярное движение и, не касаясь стенок влагалища, удаляют зонд из половых путей. Затем совершают действия, аналогичные соскобу из уретры;
  • из ротоглотки забор происходит натощак. Придерживая кончик языка, зондом производят мазок с задней стенки глотки, по миндалинам или по небным дужкам. Не соприкасаясь со слизистой ротовой полости и зубами, зонд выводится и отправляется на пцр-исследование;
  • из конъюнктивы, предварительно очистив физиологическим раствором гнойные выделения, производят соскоб слизистой нижнего века от латерального к медиальному краю. Веко при этом придерживается медицинским работником во избежание соприкосновения зонда со слизистой глаза и ресницами.

Подготовка к исследованию

Анализ на ПЦР является самым быстрым и достоверным способом на ранних этапах обнаружить инфекцию, но бывают и ложноположительные/ложноотрицательные результаты.

Для сохранения нервной системы как своей, так и сотрудников медицинского учреждения, следует правильно подготовиться к исследованию.

Подготовка к ПЦР у мужчин

Перед исследованием ПЦР мужчинам следует помнить, чего делать нельзя:

  • мочиться за 3 часа до исследования;
  • производить спринцевание и стерильную обработку члена;
  • мыть член мылом, содержащим антибиотик;
  • заниматься сексом за двое суток до ПЦР на ИППП;

Подготовка к ПЦР в гинекологии

Женщинам перед тем как сдать мазок на ПЦР запрещено:

  • при соскобе из уретры запрещено мочиться за 3 часа до исследования;
  • использовать вагинальные растворы с дезинфицирующими свойствами;
  • за двое суток до исследования применять суппозитории для влагалища;
  • использовать антибиотики местно, в том числе и мыло с антибиотиком;
  • занятия сексом за 48 часов до исследования;
  • применять антибиотик внутрь влагалища и уретры;
  • спринцеваться;
  • принимать антибиотики. После последнего приема антибактериального препарата должно пройти не менее 4 недель;
  • сдавать ПЦР во время менструации.

Общие сведения при исследовании мочи для мужчин и женщин

Следует сдать на анализ первую мочу утром, ее среднюю порцию. Другими словами начинать мочиться следует в унитаз. Затем остановить акт мочеиспускания, подставить под уретру баночку для сбора мочи, продолжить мочиться в течении 2-3 секунд, затем снова остановить мочеиспускание и, убрав контейнер, закончить акт мочеиспускания в унитаз.

Женщинам и мужчинам перед тем как сдать ПЦР следует хорошо вымыть наружные половые органы для исключения попадания в мочу смегмы (смесь секрета сальных желез крайней плоти) и выделений из влагалища.

Баночка для мочи должна быть стерильной. Попросите контейнер в клинике, где вы сдаете анализ, либо заранее приготовьте баночку с плотно закрывающейся крышкой и прокипятите их не менее 10 минут.

Непосредственно перед сдачей ПЦР запрещено:

  • мочиться (необходима самая первая порция мочи за день);
  • изменять количество выпитой за сутки до исследования жидкости. Это необходимо, чтобы поддерживать обычный водно-электролитный баланс организма, в котором себя комфортно чувствует потенциальный возбудитель инфекции;
  • использовать уросептики;
  • применять мыло, содержащее в себе антибиотик;
  • заниматься сексом за 12 часов до исследования;
  • при менструации желателен забор мочи уретральным катетером для исключения попадания крови в контейнер с мочой;

Если один из пунктов был нарушен:

Следует воздержаться от проведения диагностики инфекций методом ПЦР. Если же все-таки анализ был сдан, следует его повторить через двое суток. Если при использовании антисептиков и антибиотиков результат оказался «хорошим» – не стоит радоваться. Скорее всего, при наличии определенных жалоб, это ложноположительный результат.

Расшифровка результатов ПЦР

Расшифровка анализов ПЦР очень просто (см примерный бланк выше). Существует положительный и отрицательный результаты исследования.

Положительный означает, что инфекция в организме есть, но это не должно наводить страх на пациента. Наоборот, это значит, что теперь можно начать лечение и вовремя остановить патоген.

Отрицательный результат, соответственно, показывать отсутствие инфекции в организме.

Также не стоит забывать о ложноположительных/ложноотрицательных результатах. В медицине золотым стандартом является три одинаковых результата подряд в независимых клиниках. Стоит помнить, что в разных клиниках сама КДЛ (клинико-диагностическая лаборатория) может быть одна.

То есть, здания и названия будут разные, но все анализы отправляются в одну лабораторию, связывающую эти клиники.

Поэтому, получив результат в одной клинике, для того, чтобы удостовериться в правильности данного результата, стоит обратиться еще в две клиники и узнать, не сдают ли они результаты в одну и ту же КДЛ.

Широкий спектр исследований

Метод ПЦР относится к группе обширных анализов. С помощью ПЦР анализа можно определить практически любое заболевание. К сожалению, это не самый дешевый метод исследования, поэтому его не назначают всем пациентам поголовно. Цены могут варьироваться в зависимости от клиники и количества исследований.

Существует полимеразная цепная реакция (анализы ПЦР) на 12 инфекций. Какие инфекции входят в ПЦР 12:

  • микоплазмы гениталиум (mycoplasma genitalium) и гоминис (hominis);
  • трихомонады (trichomonas);
  • хламидии (chlamydia trachomatis);
  • уреаплазмы (ureaplasma, включающая ureaplasma parvum (уреаплазмы парвум));
  • кандиды (candida);
  • гарднереллы (gardnerella vaginalis);
  • гонококк (neisseria gonorrhoeae);
  • антитела IgG, IgM;
  • герпеса двух типов.

Также есть упрощенная ПЦР 6 диагностика. Она исключает уреаплазму парвум, кандиды, гонококк, IgG, IgM, герпес обоих типов.

Пцр исследование на вич

ПЦР на ВИЧ следует выделить отдельным пунктом, так как тут существует специфический набор ограничений.

Во-первых, ПЦР на ВИЧ определяет не ДНК вируса иммунодефицита человека, а ДНК измененной вирусом клетки-лимфоцита. В нем будет храниться информация о вирусе и размножаться, создавая все больше пораженных лимфоцитов.

Сдавать анализ следует через 14 суток после известного контакта с ВИЧ-инфицированным человеком. Стоит помнить, что заразность этого вируса несколько преувеличена из-за тяжести нелеченного заболевания. Если произошел контакт через кровь, то тут шанс заразиться самый высокий, однако и он не превышает 85%. При остальных контактах вероятность заражения составляет от 1% до 10%.

При исследовании ПЦР на ВИЧ вероятность ложноположительного результата составляет около 2%, если не было нарушений среди медицинского персонала (правильно маркированная пробирка, не перепутали пробирки местами, не было загрязнения материала при вскрытии пробирки).

Длительность ПЦР может составлять от 4 часов до 7 суток, в зависимости от организованности медицинского учреждения, где происходит диагностика инфекций.

Плюсы и минусы ПЦР

При отражении плюсов ПЦР следует отметить:

  • чувствительность. Как говорилось выше, даже единичный агент, оставленный возбудителем, позволяет обнаружить инфекцию на ее ранней стадии или если она протекает скрытно;
  • широкий спектр. Например, ПЦР 6 позволяет 1 исследованием выявить целых 6 возбудителей;
  • точность. Ложные результаты при данном методе исследования имеют место быть, но их количество сведено к минимуму;
  • скорость. Как правило, пациент уже на следующий день может забрать готовый результат ПЦР исследования.

Минусы:

  • стоимость. ПЦР-исследование не включено в список исследований в системе ОМС. Дорогое высокоточное оборудование требует оплаты своей работы;
  • требования к соблюдению техники исследования и к профессионализму сотрудников;
  • требования к подготовке.

записи по теме

Интересное

   

Источник: https://tvojajbolit.ru/issledovaniya/polimeraznaya-tsepnaya-reaktsiya-ptsr-diagnostika-chto-eto-takoe/

ЖенскийДоктор
Добавить комментарий